一、液相色譜儀的選擇

 

    1、柱子的PH值使用范圍

 

    反相柱優(yōu)點(diǎn)是固定相穩(wěn)定，應(yīng)用廣泛，可使用多種溶劑。但硅膠為基質(zhì)的填料，使用時一定要注意流動相的PH范圍。一般的C18柱PH值范圍都在2-8，流動相的PH值小于2時，會導(dǎo)致鍵合相的水解；當(dāng)PH值大于7時硅膠易溶解；經(jīng)常使用緩沖液固定相要降解。一旦發(fā)生上述情況，色譜柱人口處會塌陷。同樣填料各種不同牌號的色譜柱不盡相同。

 

    2、填料的端基封尾（或稱封口）

 

    把填料的殘余硅羥基采用封口技術(shù)進(jìn)行端基封尾，可改善對極性化合物的吸附或拖尾；含碳量增高了，有利于不易保留化合物的分離；填料穩(wěn)定性好了，組分的保留時間重現(xiàn)性就好。如果待分析的樣品屬酸性或堿性的化合物，選用填料經(jīng)端基封尾的色譜柱。

 

    二、液相色譜儀的使用

 

    色譜柱在使用前，進(jìn)行柱的性能測試，并將結(jié)果保存起來，作為今后評價柱性能變化的參考。在做柱性能測試時要按照色譜柱出廠報告中的條件進(jìn)行（出廠測試所使用的條件是條件），只有這樣，測得的結(jié)果才有可比性。但要注意：柱性能可能由于所使用的樣品、流動相、柱溫等條件的差異而有所不同。

 

    1、樣品的前處理

 

    a、使用流動相溶解樣品。

 

    b、使用預(yù)處理柱除去樣品中的強(qiáng)極性或與柱填料產(chǎn)生不  可逆吸附的雜質(zhì)。

 

    c、使用0.45μm的過濾膜過濾除去微粒雜質(zhì)。

 

    2、流動相的配制

 

    液相色譜儀是樣品組分在柱填料與流動相之間質(zhì)量交換而達(dá)到分離的目的，因此要求流動相具備以下的特點(diǎn)：

 

    a、流動相對樣品具有一定的溶解能力，保證樣品組分不會沉淀在柱中（或長時間保留在柱中）。

 

    b、流動相與樣品不產(chǎn)生化學(xué)反應(yīng)

 

    c、流動相的黏度要盡量小，以便得到好的分離效果；降低柱壓降，延長泵的使用壽命（可運(yùn)用提高溫度的方法降低流動相的黏度）。

 

    d、流動相的物化性質(zhì)要與使用的檢測器相適應(yīng)。如使用UV檢測器，使用對紫外吸收較低的溶劑配制。

 

    e、流動相沸點(diǎn)不要太低，否則容易產(chǎn)生氣泡，導(dǎo)致實驗無法進(jìn)行。

 

    f、在流動相配制好后，一定要進(jìn)行脫氣。除去溶解在流動相中的微量氣體既有利于檢測，還可以防止流動相中的微量氧與樣品發(fā)生作用。

 

    3、流動相流速的選擇

 

    因柱效是柱中流動相線性流速的函數(shù)，使用不同的流速可得到不同的柱效。對于一根特定的色譜柱，要追求柱效，使用流速。對內(nèi)徑為4.6mm的色譜柱，流速一般選擇1ml／min，對于內(nèi)徑為4.0mm柱，流速0.8ml／min為佳。

 

    當(dāng)選用流速時，分析時間可能延長。液相色譜儀可采用改變流動相的洗滌強(qiáng)度的方法以縮短分析時間（如使用反相柱時，可適當(dāng)增加甲醇或乙腈的含量）。

 

    注意：

 

    a.含水流動相在實驗前配制，尤其是夏天使用緩沖溶液作為流動相不要過夜。加入，防止細(xì)菌生長。

 

    b.流動相要求使用0.45 μm濾膜過濾，除去微粒雜質(zhì)。

 

    c.使用HPLC級溶劑配制流動相，使用合適的流動相可延長色譜柱的使用壽命，提高柱性能。

 

    三、液相色譜儀的維護(hù)

 

    1、色譜柱的平衡

 

    反相色譜柱由工廠測試后是保存在乙腈/水中的。新柱應(yīng)先使用10－20倍柱體積的甲醇或乙腈沖洗色譜柱。請一定確保您分析樣品所使用的流動相和乙腈/水互溶。 每天用足夠的時間以流動相來平衡色譜柱，您就會在處理問題方面獲得的"補(bǔ)償"，而且您的色譜柱的壽命也會變得更長！操作步驟：

 

    a、平衡開始時將流速緩慢地提高，用流動相平衡色譜柱直到獲得穩(wěn)定的基線（緩沖鹽或離子對試劑流速如果較低，則需要較長的時間來平衡）

 

    b、如果使用的流動相中含有緩沖鹽，應(yīng)注意用純水"過渡"即每天分析開始前必須先用純水沖洗30分鐘以上再用緩沖鹽流動相平衡； 分析結(jié)束后必須先用純水沖洗30分鐘以上除去緩沖鹽之后再用甲醇沖洗30分鐘保護(hù)柱子。

 

    2、色譜柱的再生

 

    長期使用的色譜柱，往往柱效會下降（柱子的理論塔板數(shù)減低）。液相色譜儀可以對色譜柱進(jìn)行再生，在有條件的實驗室應(yīng)使用一個廉價的泵進(jìn)行柱子的再生。