血液中乙醇的測(cè)定

頂空氣相色譜法

1 范圍

本技術(shù)規(guī)范規(guī)定了血液中乙醇的頂空氣相色譜測(cè)定方法。

本技術(shù)規(guī)范適用于血液中乙醇的定性及定量分析。

本技術(shù)規(guī)范的方法檢出限為0.01mg/mL；定量下限為0.05mg/mL。

2 規(guī)范性引用文件

下列文件對(duì)于本技術(shù)規(guī)范的應(yīng)用是*的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本技術(shù)規(guī)范。凡是不注日期的引用文件，其版本（包括所有的修改單）適用于本技術(shù)規(guī)范。

GB/T 6682  分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法（GB/T 6682-2008，ISO 3696：1987，MOD）

GA/T 122  毒物分析名詞術(shù)語(yǔ)

3 原理

本法利用乙醇的易揮發(fā)性，以叔丁醇為內(nèi)標(biāo)，用頂空氣相色譜火焰離子化檢測(cè)器進(jìn)行檢測(cè)，經(jīng)與平行操作的乙醇對(duì)照品比較，以保留時(shí)間進(jìn)行定性分析；以峰面積為依據(jù)，用內(nèi)標(biāo)法定量。

4 試劑和材料

除另有說(shuō)明外，水為GB/T 6682規(guī)定的二級(jí)水。

4.1　乙醇

色譜純。

4.2　乙醇標(biāo)準(zhǔn)溶液

精密稱(chēng)取適量乙醇，用水配成10.0mg/mL乙醇標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液。儲(chǔ)備液在冰箱中冷藏密閉保存，有效期為6個(gè)月。試驗(yàn)中所用其它濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液均從上述儲(chǔ)備液稀釋而得，在冰箱中冷藏密閉保存，有效期為3個(gè)月。

4.3　叔丁醇

色譜純。

4.4　叔丁醇溶液

精密稱(chēng)取適量叔丁醇，用水配成5.0mg/mL叔丁醇儲(chǔ)備液。儲(chǔ)備液在冰箱中冷藏密閉保存，有效期為12個(gè)月。將儲(chǔ)備液用水稀釋?zhuān)?0.0μg/mL叔丁醇內(nèi)標(biāo)工作液，在冰箱中冷藏密閉保存，有效期為6個(gè)月。

5 儀器

5.1　氣相色譜儀

配火焰離子化檢測(cè)器（FID）。

5.2　頂空進(jìn)樣器

配1mL定量進(jìn)樣環(huán)。

5.3　樣品瓶

10mL，頂空自動(dòng)進(jìn)樣器用。

5.4　硅橡膠墊

5.5　鋁帽

5.6　密封鉗

5.7　精密移液器

5.8　自動(dòng)稀釋儀

6 測(cè)定步驟

6.1　樣品處理

用精密移液器或自動(dòng)稀釋儀取待測(cè)血液0.10 mL及0.50 mL 40.0μg/mL 叔丁醇內(nèi)標(biāo)工作液，加入樣品瓶?jī)?nèi)，蓋上硅橡膠墊，用密封鉗加封鋁帽，混勻。

6.2　測(cè)定

6.2.1　頂空氣相色譜測(cè)定參考條件

a） 色譜柱（1）：DB-ALC1（30m´0.32mm´1.8mm）石英毛細(xì)管柱或相當(dāng)者；

柱溫：恒溫40°C；

色譜柱（2）：DB-ALC2（30m´0.32mm´1.2mm）石英毛細(xì)管柱或相當(dāng)者；

柱溫：恒溫40°C；

b）載氣：氮?dú)?，純?ge;99.999%，流速8mL/min；

c）進(jìn)樣口溫度：150°C；

d）檢測(cè)器溫度：250°C；

e）加熱箱溫度：65°C；

f）定量環(huán)溫度：105°C；

g）傳輸線溫度：110°C；

h）氣相循環(huán)時(shí)間：3.5min；

i）樣品瓶加熱平衡時(shí)間：10.0min；

j）樣品瓶加壓時(shí)間：0.10min；

k）定量環(huán)充滿時(shí)間：0.10min；

l）定量環(huán)平衡時(shí)間：0.05min；

m）進(jìn)樣時(shí)間：1.00min。

6.2.2　定性測(cè)定

樣品溶液按照頂空氣相色譜測(cè)定條件測(cè)定，以叔丁醇為內(nèi)標(biāo)，記錄色譜峰的保留時(shí)間。將待測(cè)樣品色譜峰的保留時(shí)間與乙醇標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品的保留時(shí)間比較，相對(duì)誤差在±2%內(nèi)，空白對(duì)照樣品內(nèi)標(biāo)物色譜峰正常而無(wú)乙醇的色譜峰，一般可以認(rèn)為待測(cè)樣品中含有乙醇；必要時(shí)，選擇不同的色譜條件或用氣相色譜-質(zhì)譜法確證。如果內(nèi)標(biāo)物色譜峰正常，而無(wú)乙醇的色譜峰時(shí)，可認(rèn)為檢驗(yàn)結(jié)果為陰性。乙醇對(duì)照品和內(nèi)標(biāo)氣相色譜圖，參見(jiàn)附錄A。

6.2.3　定量測(cè)定

本方法采用內(nèi)標(biāo)法－校準(zhǔn)曲線法或內(nèi)標(biāo)法－單點(diǎn)校正法定量測(cè)定。

6.2.3.1  內(nèi)標(biāo)法－校準(zhǔn)曲線法

采用內(nèi)標(biāo)-校準(zhǔn)曲線法測(cè)定（見(jiàn)附錄B）。將乙醇對(duì)照品溶液進(jìn)樣，以乙醇和內(nèi)標(biāo)峰面積比為縱坐標(biāo)，乙醇對(duì)照品工作溶液濃度為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，用標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)待測(cè)樣品進(jìn)行定量，所測(cè)樣品中乙醇的濃度值應(yīng)在線性范圍內(nèi)。

6.2.3.2  內(nèi)標(biāo)法－單點(diǎn)校正法

待測(cè)血液樣品乙醇濃度在標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度的±30%內(nèi)可用單點(diǎn)法定量。

6.3　平行試驗(yàn)

按以上步驟對(duì)同一待測(cè)樣品進(jìn)行平行試驗(yàn)。

單柱單檢測(cè)器兩份樣品測(cè)定結(jié)果按兩份樣品的平均值計(jì)算，雙樣相對(duì)相差不得超過(guò)10％（有凝塊的血樣不超過(guò)15％）。雙樣相對(duì)相差按式（1）計(jì)算：

                                    | C1 - C2|

雙樣相對(duì)相差（%） = ¾¾¾¾¾ ´ 100     ………………………………（1）

                                      `C

式中：

C1、C2¾¾兩份樣品平行定量測(cè)定的結(jié)果；

`C ¾¾兩份樣品平行定量測(cè)定結(jié)果的平均值(C1+C2)/2。

雙柱雙檢測(cè)器兩份樣品測(cè)定結(jié)果的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD（%）若不超過(guò)5％時(shí)（有凝塊的血樣不超過(guò)10%），結(jié)果按兩份樣品結(jié)果的平均值計(jì)算。

7 結(jié)果計(jì)算

血液中乙醇濃度測(cè)定采用內(nèi)標(biāo)法－校準(zhǔn)曲線法定量或按式(2)計(jì)算：

                                 A´ Ai′´c         

                   C = ¾¾¾¾¾¾         …………………………………（2）

                                  A′´Ai            

式中：

C¾¾血液樣品中乙醇濃度，單位為毫克每毫升(mg/mL)；

A¾¾血液樣品中乙醇的峰面積；

A′¾¾標(biāo)準(zhǔn)溶液中乙醇的峰面積；

Ai′¾¾標(biāo)準(zhǔn)溶液中內(nèi)標(biāo)物的峰面積；

Ai¾¾血液樣品中內(nèi)標(biāo)物的峰面積；

c¾¾標(biāo)準(zhǔn)溶液中乙醇濃度，單位為毫克每毫升(mg/mL)。

附　錄　A
（資料性附錄）
乙醇對(duì)照品和內(nèi)標(biāo)氣相色譜圖

A.1 按色譜柱（1）條件得乙醇對(duì)照品和內(nèi)標(biāo)氣相色譜圖，見(jiàn)圖A.1。

圖A.1 按色譜柱（1）條件得的乙醇對(duì)照品和內(nèi)標(biāo)氣相色譜圖

A.2 按色譜柱（2）條件得乙醇對(duì)照品和內(nèi)標(biāo)氣相色譜圖，見(jiàn)圖A.2。